环氧乙烷压力蒸汽灭菌器灭菌试验操作程序

环氧乙烷压力蒸汽灭菌器灭菌试验操作程序
 

(1) 根据试验要求,制备枯草杆菌黑色变种芽孢悬液和菌片。菌片放入双层聚乙烯塑料袋内密封包装,每袋 2 片。每次试验用 20 袋。

(2) 将灭菌器上、中、下 3 层,每层内、中、外各设一点，共设 9 点。每点物品中间布放1 袋,共需 18 袋试验菌片。另将一袋（2 片）菌片放置在室温条件下作为阳性对照。

(3)按使用说明书所规定的环氧乙烷浓度、作用时间、柜内的温度和相对湿度,在满载条件下进行环氧乙烷灭菌处理。满载用物品,随灭菌器用途而定。处理完毕，取出菌片,分别移种于 5 ML 营养肉汤培养基中,置 37℃ 培养箱内培养,7 D后观察最终结果(定性培养检测)。

对难以判断结果的营养肉汤管,取其中 0.2ML 悬液接种营养琼脂平板, 用无菌L 棒涂抹均匀, 置 37℃ 培养箱内培养。48H后涂片染色，显微镜下观察菌落形态,或进一步做其他试验,判断有无生长或生长的是否为试验菌。若为非试验菌，则应重新进行试验。

(4) 测试中,应同时设立定性和定量阳性对照组(菌片对照)与阴性对照组(培养基对照)。

(5) 定量阳性对照组,以同批试验用菌片置室温下,待消毒或灭菌试验组达规定作用时间后,立即将该菌片 2 片分别放入含 5.0ML PBS 试管中,各振敲 80 下。取洗液进行活菌培养计数。

(6) 定性阳性对照组，以同批试验用菌片置室温下,待灭菌试验组达规定作用时间后,立即将该菌片 2 片，分别接种于 5.0ML 营养肉汤培养基,放入温箱中作定性培养,观察有细菌生长情况。

(7) 阴性对照组,以同批次试验用未染菌样片 2 片，分别接种于 5.0ML营养肉汤培养基,同时将未接种过的营养肉汤培养基放入培养箱中作定性培养,观察有无细菌生长。

(8) 试验重复 5 次。

(9)在5次试验中,每次试验中的阳性对照菌片,回收菌量均应在5×`10^5`CFU/片～5×`10^6`CFU/片；定性阳性对照组，细菌生长良好；阴性对照应无菌生长。阳性或阴性对照若有不符合上述要求的结果,试验作废,重新进行。