供试品抑细菌抑真菌试验规程

供试品抑细菌抑真菌试验规程
目的：
    建立供试品抑细菌和抑真菌试验的基本操作，以判定供试品有无抑菌性，为采用直接接种法或薄膜过滤法进行无菌检验提供依据。
    2.  依据：    
     《中华人民共和国药典》2000年版二部。
    3.  范围：
     本标准适用于供试品有无抑菌性的验证。
    4.  职责：
     QC无菌检验员对本标准的实施负责。
    5.  程序：
    5.1.  实验用具：
 电热恒温培养箱、试管、试管架、刻度吸管、注射器、针头、砂轮、75%酒精棉球。
    5.2.  培养基：
     需气菌、厌气菌培养基（流体硫乙醇酸盐培养基）
     真菌培养基。
    5.3.  菌液：
    5.3.1.  金黄色葡萄球菌菌液[CMCC（B）26003]：取金黄色葡萄球菌的营养琼脂斜新鲜培养物1白金耳，接种至营养肉汤培养基内，在30-35℃培养16-18小时后，用0.9%无菌氯化钠溶液稀释至每1ml中含10-100个菌。
    5.3.2.  生孢梭菌菌液[CMCC（B）64941]：取生孢梭菌的需气菌、厌气菌培养基新鲜培养物1白金耳，再接种至相同培养基内，在30-35℃培养18-24小时后，用0.9%无菌氯化钠溶液稀释至每1ml中含10-100个菌。
    5.3.3.  白色念珠菌菌液[CMCC（F）98001]：取白色念珠菌的真菌琼脂培养基斜面新鲜培养物1白金耳，接种至真菌培养基内，在20-25℃培养24小时后，用0.9%无菌氯化钠溶液稀释至每1ml中含10-100个菌。
    5.4.  操作法：
    5.4.1.  取经过灭菌培养后的配制好的需气菌、厌气菌培养基2管，各加入金黄色葡萄球菌菌液1ml，再向其中1管加入规定量的供试品溶液。
    5.4.2.  取经过灭菌培养后的配制好的需气菌、厌气菌培养基2管，各加入生孢梭菌菌液1ml，再向其中1管加入规定量的供试品溶液。
    5.4.3.  取配制好经过灭菌及培养后的真菌培养基2管，各加入白色念珠菌1ml，向其中1管加入规定量的供试品溶液。
    5.4.4.  需气菌、厌气菌培养基管置30-35℃培养箱中，真菌培养基管置20-25℃培养箱中，培养3-5天。
    5.4.5.  培养期间内应逐日观察并记录是否有菌生长。
    5.5.  结果判断：
    如培养基各管24小内微生物生长良好,则供试品无抑菌作用,如加供试品的培养基管与未加供试品的培养基管对照比较,微生物生长微弱缓慢或不生长,均判为供试品有抑菌作用。该供试品需用稀释法或中和法、薄膜过滤法处理，消除供试品的抑菌性后，方可接种至培养基。
    6.  附：供试品抑真菌抑细菌试验记录ZL0080 00。