MS培养基的配制与灭菌
2010-06-24
MS培养基的配制与灭菌
一、目的要求
通过MS固体培养基的配制，掌握配制培养基的基本技能。
二、仪器与用具
1、仪器：酸度计或pH试纸、电磁搅拌器、电炉
2、用具：压力蒸汽灭菌器、微量移液器、移液管、量筒、容量瓶、培养瓶（三角瓶）、烧杯、标签
3、试剂：配制MS培养基的各种母液、生长调节剂、琼脂、蔗糖、蒸馏水、0.1 N 、0.5N NaOH，0.1 N 、0.5N HCl
三、方法步骤
（一）MS固体培养基的配制
1、将配制好的MS培养基母液从冰箱中取出，按顺序排列，并逐一检查是否沉淀或变色，避免使用已失效的母液。
2、取少量的蒸馏水（约为配制培养基量的2/3）加入烧杯中。
注意：配500ml培养基用1000ml烧杯。
3、按母液顺序和规定量，用量筒、移液管或微量移液器取母液，依次放入烧杯中。
如配制1000ml培养基：
需：MS大量元素母液 100ml
MS微量元素母液 10ml
MS铁盐母液 10ml
MS有机物母液 10ml
4、通过计算，用微量移液器取所需的各种生长调节剂母液。
5、加入蔗糖（30g/L），溶解。
6、定容：用容量瓶。
7、调pH值：一般pH=5.8。
用0.1 N 和0.5N 的NaOH和HCl 将pH调至所需的数值。
注意：①经压力蒸汽灭菌器灭菌后，培养基的pH值会下降0.2—0.8，故调整后的pH值应高于目标pH值0.5个单位。
②pH值的大小会影响琼脂的凝固能力，一般当pH大于6.0时，培养基将会变硬；低于5.0时，琼脂就不能很好地凝固。
③如果pH值与所需的数值相差很大，可先用0.5N的NaOH或HCl调节，至接近时，再用0.1N的酸、碱调节。以免加入过量的水溶液，导致溶液体积增大，培养基不能很好地凝固（因加入的琼脂量一定）。
8、分装到大三角瓶中（500ml、1000ml）。
9、加琼脂（6-10g/L）。常用6.6--7 g/L
10、封口：用棉塞或锡箔纸、牛皮纸。注明培养基名称、配制时间。
或者：5、加入蔗糖。
6、加琼脂，煮沸1-2分钟（熔化琼脂）。
7、定容，pH值。
8、分注到培养瓶中。100-150ml培养瓶每瓶装入20-35ml左右的培养基。
（二） MS固体培养基的灭菌——高压蒸汽灭菌（湿热灭菌法）
1、洗涤：把组织培养基用的培养皿、三角瓶、试管等玻璃器皿进行彻底清洗。自然晾干或烘箱干燥。
2、包扎：用牛皮纸、报纸、纱布或锡箔纸把玻璃器皿和金属器械分别包扎好。
3、装水：在压力蒸汽灭菌器内装入一定量的水（水要淹没电热丝）。（切忌干烧！）
4、装物品：在压力蒸汽灭菌器内放入含培养基的培养瓶或三角瓶、装蒸馏水的玻璃瓶，以及包扎好的玻璃器皿和金属器械等。
5、灭菌：将排气阀开着，加热，直至锅内释放出大量水蒸气（此时水蒸气横向喷出），再关闭阀们；或者当锅内压力升至49.0KPa时，开启排气阀，将锅内的冷空气全部排出。当锅内压力达到108KPa时，温度为121℃时，维持15-20分钟，即可达到灭菌的目的。（若灭菌时间过长，会使培养基中的某些成分变性失效。）切断电源，让灭菌锅自然冷却。
注意：①先打开放气阀，再打开锅盖。（以免锅内压力大而爆炸！）
②开盖后应尽快转移培养瓶，使培养瓶冷却、凝固。一般应将灭菌后的培养瓶储藏于30℃以下的室内，最好储藏在4-10℃的条件下。
③某些生长调节剂如IAA、ZT、ABA等以及某些维生素遇热是不稳定的，不能同培养基一起高压灭菌，而需要进行过滤灭菌。